ELISAの種類
ELISAは抗原の定量にも抗体の定量にも使用することができます。このアッセイには3つの必要な試薬があります：（1）固相担体に吸着された抗原または抗体。（2）酵素標識された抗原または抗体。（3）酵素反応の基質。試薬の供給源、検体、および試験の特定の条件に応じて、さまざまな種類の試験方法を設計することができます。
ELISAの検出と分類については異なる見解があり、原理や操作の観点から異なる文献には異なる分類意見があります。ここでは、ELISAを以下の4つのカテゴリーに分けて、それぞれを詳しく説明します：（1）直接ELISA；（2）間接ELISA；（3）サンドイッチELISA；（4）競合阻害ELISA。他のすべてのELISA法は、これら4種類のELISAに属するか、これら4種類のELISAの組み合わせから派生したものです。
1. 直接ELISA
直接ELISAは手順の点で最も単純なELISAです。その方法は、抗原または抗体を直接固相担体にコーティングし、次に酵素標識された抗体または抗原と特異的に結合させ、その後酵素で基質の発色を触媒します。発色の濃さは、添加された酵素標識抗体または抗原の量に比例します。直接ELISAは操作が非常に簡単でステップが比較的簡潔ですが、その応用範囲は依然としてかなり限られています。重要な理由の1つは、この種のELISAには信号増幅のステップが1つしか含まれていないため、感度がそれほど高くないことです。さらに、検出できる物質も非常に限られており、酵素標識された分子しか測定できません。
2. 間接ELISA
間接ELISAは主に抗体検出に使用されます。初期の手順ステップは直接ELISAとほぼ一致しますが、主な違いは、間接ELISAでは、前もってコーティングされた抗原に結合する分子が酵素標識された抗体ではなく、非標識の抗体であることです。続いて、2次抗体が添加されます；この2次抗体は酵素標識されており、一次抗体と特異的に結合することができます。最後に、基質が導入されて発色が誘導され、結果が解釈されます。2次抗体の濃度が固定されている場合、最終的な発色強度は一次抗体の量と正の相関があります。
2次抗体は一般的にポリクローナル抗体であるため、複数の2次抗体分子が単一の一次抗体分子に結合することができます。同時に、複数の酵素分子が1つの2次抗体分子に結合することができ、これにより検出感度が大幅に向上します。さらに、2次抗体は比較的容易に調製でき、長い間市販されています。これにより、操作者は一次抗体を酵素で標識する必要がなくなり、作業量が大幅に削減されます。
間接ELISAは、抗体力価、血清力価の測定、および単クローン抗体のスクリーニングにおいて重要な役割を果たします。臨床診断では、マーカー抗体の検出にも重要な方法として使用されています。
3. サンドイッチELISA
一般的に、サンドイッチELISAは2種類に分けることができます：直接サンドイッチELISAと間接サンドイッチELISA。
直接サンドイッチELISAは、さらに2つのサブタイプに分けることができます：二重抗体サンドイッチELISAと二重抗原サンドイッチELISA。
二重抗体サンドイッチELISA最初の抗体（捕捉抗体）を固相担体にコーティングします。次に、検出対象の抗原を添加します。インキュベーション後、2番目の抗体（検出抗体）が導入されます。捕捉抗体と検出抗体は、異なるエピトープを標的とする2つの単クローン抗体であるか、同じ抗原を標的とする1つの単クローン抗体と1つのポリクローナル抗体であることができます。ただし、検出抗体は酵素標識されている必要があります。二重抗体サンドイッチELISAの場合、対象分析物（検出対象の抗原）は2つ以上のエピトープを含んでいる必要があります。そうでない場合、検出抗体は抗原に結合できません。例えば、ハプテンや小分子抗原は、二重抗体サンドイッチELISAでは検出できません。
二重抗原サンドイッチELISA操作は二重抗体サンドイッチアッセイと基本的に同じです。違いは、コーティングされた物質が抗原であり、検出対象が抗体であり、次に酵素標識された抗原が添加され、その後基質が添加されて発色が誘導されることです。
間接サンドイッチELISAその原理は以下の通りです：種特異的抗体を固相担体にコーティングして捕捉抗体とします。ブロッキングステップの後、検出対象の抗原を添加してインキュベーションします。洗浄後、別の種特異的抗体を添加して検出抗体とします。最後に、酵素標識された2次抗体を導入し、次に基質を添加して発色を誘導します。
一般的に、サンドイッチELISAは直接サンドイッチELISAと間接サンドイッチELISAの2種類に分けることができます。
直接サンドイッチELISAと比較して、間接サンドイッチELISAには検出抗体を特異的に認識する酵素標識2次抗体が組み込まれています。これは、システム全体に追加の信号増幅ステップを追加することに相当し、最終結果は直接二重抗体サンドイッチELISAよりも感度が高くなります。同時に、間接サンドイッチELISAの酵素標識2次抗体は検出抗体のみを認識し、捕捉抗体を認識しないため、システムの特異性も保証されます。したがって、当社のELISAキットのほとんどはこの方法を採用しており、合計2,000種類以上あります。ご需要がある場合は、お問い合わせください。当社のウェブサイトをご覧になって、ELISAキットをご確認ください。
4. 競合阻害ELISA
競合阻害ELISAはブロッキングELISAとも呼ばれ、その主な原理は、検出対象の抗原または抗体を使用して事前に設計されたシステムに干渉することです。最終的な発色結果は、検出対象の抗原または抗体によって引き起こされる干渉の程度と負の相関があります。競合阻害ELISAは高い柔軟性を持ち、それに基づいてより複雑な実験プロトコルを設計することができ、直接競合阻害ELISA、間接競合阻害ELISA、サンドイッチ競合ELISAなどの多様な特殊ELISA法が派生しています。ここでは、直接競合阻害ELISAと間接競合阻害ELISAを例に挙げて、その原理を簡単に説明します。
直接競合阻害ELISA抗原は固相担体に事前にコーティングされ、酵素標識された特異的抗体が添加されます。実験中に、検出対象の抗原または抗体が導入されます。検出対象が抗原である場合、固相担体上の事前にコーティングされた抗原と添加された酵素標識抗体を競合します。検出対象が抗体である場合、添加された酵素標識抗体と競合して固相担体にコーティングされた抗原に結合します。どちらの場合も、競合に敗れた酵素標識抗体は洗浄ステップで洗い流され、その後基質が添加されて発色が誘導されます。発色結果は、検出対象の抗原または抗体の量に反比例します。直接競合阻害ELISAには信号増幅のステップが2つ含まれているため、比較的高い感度があります。固相担体を事前にコーティングし、酵素標識抗体を添加した後、実験では検出対象の抗原または抗体を希釈してシステムに添加して反応させるだけでよく、ELISAの操作プロセスが大幅に簡素化されます。
間接競合阻害ELISA抗原は固相担体に事前にコーティングされ、特異的抗体とその抗体に対する対応する酵素標識2次抗体が順番に添加されて予備システムが形成されます。実験中に、希釈された検出対象の抗原が添加され、被験サンプル中の抗原は予備システム中の固相担体に結合した抗原と競合して特異的抗体に結合します。同様に、被験サンプルは抗体であることもできます。間接競合阻害ELISAは、酵素標識2次抗体によって媒介される信号増幅効果の恩恵を受け、より高い検出感度を持っています。この方法では一次抗体を標識する必要がなく、市販の酵素標識2次抗体を使用してさまざまな一次抗体に適応することができるため、汎用性が強くなります。同時に、抗原標識プロセスのコストと技術的難易度も効果的に削減されます。この方法は新しく発売された食品安全検査キットに使用されています。ご需要がある場合は、お問い合わせください。 当社のウェブサイトをご覧になって、ELISAキットをご確認ください。
以上に紹介したいくつかの基本的なELISAの種類に加えて、実際のニーズに応じて他の種類のELISAも柔軟に設計することができます。例えば、ビオチン-アビジンを導入してシステムの増幅率を高めることができます。別の例として、非標識2次抗体、プロテインA、プロテインGなどを導入して、固相担体の負荷能力を高めたりシステムの特異性を強化したりすることができます。
 | フェリシア フェリシアはEnkiLifeの技術サポートスペシャリストで、抗体開発、最適化、ELISAアッセイの設計と応用に関する豊富な専門的経験を持っています。彼女は、お客様が適切な抗体製品を選択し、ELISA実験プロトコルを最適化し、プロセスで遭遇した技術的課題を解決することを支援し、それによって生命科学研究プロジェクトの円滑な進行をサポートすることに専念しています。 |