血清・プラズマ酵素源参考表

ELISA 実験の核心原理は、抗原と抗体の特異的な結合です。一方、検体中の内因性酵素は基質反応を非特異的に触媒したり、抗原・抗体の構造を破壊したりすることで、異常な実験シグナルや干渉を引き起こします。多くの顧客が、検体内の各種酵素源を明確にせず、ターゲットに応じて酵素阻害剤を加えないことにより、偏ったテスト結果、偽陽性または偽陰性を ELISA 実験時に遭遇することがあります。この実験上の痛所を顧客が正確に回避し、効率的に ELISA 実験を完了できるよう、EnkiLife は「血清・プラズマ酵素源参考表」を編纂しました。これにより、血清・プラズマ酵素の源と ELISA 実験干渉との関連性を普及させ、酵素源を明確化し合理的に酵素阻害剤を加えることで、干渉を排除し信頼性の高い実験結果を得られるよう支援します。

酵素カテゴリー

代表酵素(主要メンバー)

主な源(細胞/組織)

血清 vs プラズマにおける分布特性

推奨阻害剤(特定の用量は製造元の指示に従ってください)

セリンプロテアーゼ

トロンビン、プラスミン、トリプシン、エラスターゼ

? 血小板は複数のプロモジンを放出
? 好中球はエラスターゼの主な源
? 肝細胞は凝固因子の前駆体(例:フィブリンゲン)を合成
? 血管内皮細胞はカタラプシンとカリクレインを分泌

血清:凝固過程で血小板が活性化し、大量の活性型セリンプロテアーゼを放出するため、酵素活性は著しく増加します。
プラズマ:EDTA やシトラートなどの抗凝固剤を加えることで凝固カスケードが抑制されるため、酵素活性は比較的低いです。

アプロチニン
レウペプチン
PMSF(氷上で調製)
AEBSF
α1-アンチトリプシン (α1AT)
プロテアーゼ阻害剤コクティール

システインプロテアーゼ

カタラプシン B、H、L、S

? 巨噬細胞と単球には多数のリソゾームを含む
? 好中球
? 血小板

血清:リソゾームにはカタラプシンが豊富に含まれており、これらの細胞が活性化またはアポトーシスを起こす際にプロモジンや活性酵素を血液中に放出します。さらに、血小板は活性化時に少量のシステインプロテアーゼを放出できます。
プラズマ:抗凝固剤により細胞破損が防止されるため、酵素活性はさらに低くなります。

E-64
レウペプチン
プロテアーゼ阻害剤コクティール

マトリックス金属プロテアーゼ (MMPs)

MMP2、MMP9、ADAMTS13

? 血小板
? 巨噬細胞/単球/好中球
? 内皮細胞

血清:血小板が活性化すると大量の MMP-2/MMP9 を放出するため、酵素活性は著しく増加します。
プラズマ:EDTA などの金属キレート剤により金属酵素の活性が抑制されるため、濃度は比較的低くなります。

EDTA
EGTA(Ca++依存型金属酵素を特異的に阻害)
1,10-フェナントリン
DTPA

アスパルトンプロテアーゼ

ペプシン、レニン、カタラプシン D

? 腎臓(傍糸球体細胞)
? 肝臓
? 巨噬細胞

血清:血凝固により血小板が破損し、細胞内プロモジンの一部を放出する可能性があります。
プラズマ:抗凝固剤の使用により血球は intact に保たれるため、細胞内プロモジンの放出は少なくなります。

ペプスタチン A
プロテアーゼ阻害剤コクティール

アミノペプチダーゼ

アミノペプチダーゼ N (APN, CD13)、ルシチンアミノペプチダーゼ (LAP)、アミノペプチダーゼ A (APA)

? 血小板(主な源)
? 白血球
? 赤血球

血清:凝固過程で血小板は大量のプロモジンを放出し、遠心後には活性型酵素に変化します。
プラズマ:EDTA やヘパリンなどの抗凝固剤を加えることで血小板凝集を効果的に抑制でき、血小板由来のアミノペプチダーゼの放出が著しく減少します。

ベスタチン
アマスタチン
4,7-ジメチル-1,10-フェナントリン
EDTA

ホスファターゼ

酸性ホスファターゼ (ACP)、アルカリ性ホスファターゼ (ALP)、タンパク質チロシンホスファターゼ (PTPs)

? 血小板
? 白血球(特に好中球)

血凝固により血小板が活性化し顆粒内容物を放出します。血小板は酸性ホスファターゼを豊富に含んでいるため、血清中の酸性ホスファターゼ活性は通常、プラズマよりも高いです。

NaF
(注:原文の Na?VO? は Na3VO4 を意図している可能性がありますが、一般的な阻害剤として NaF が記載されています)

キナーゼ

チロシンキナーゼ、セリン/スレオニンキナーゼ、複合キナーゼ

? 血小板
? 白血球
? 血管内皮細胞

血清:刺激後、血小板は cAMP 依存型プロテインキナーゼ (PKA) を放出し、これが血清中の特定のタンパク質をリン酸化する。
プラズマ:血小板貧乏血漿 (PPP) には通常、血小板由来の活性 PKA は含まれていませんが、他のキナーゼやプロモジンの低レベルは含まれることがあります。

スタウロスポリン(広域キナーゼ阻害剤)
プロテアーゼ・ホスファターゼ阻害剤コクティール

リパーゼ/フォスホリパーゼ

膵リパーゼ、脂質タンパク質リパーゼ (LPL)、フォスホリパーゼ A2 (PLA2)、フォスホリパーゼ C (PLC)

? 血小板 (PLA? の主な源)
? 血管内皮細胞
? 膵臓 (膵リパーゼの主な源)

血清:血小板が活性化すると PLA? が大量に放出され、酵素活性が増加します。
プラズマ:抗凝固剤により血小板の活性化が抑制されるため、酵素活性は比較的低くなります。

オリストート
メチルインドキサム
ヴァレスプラジブ

グリコシダーゼ

β-ガラクトシダーゼ、β-N-アセチルグルコサミニダーゼ、α-マノシダーゼ

? 血小板
? 白血球

血清:血凝固過程で血小板が活性化すると、β-グルコシダーゼ(注:原文は glucosidase ですが、文脈から galactosidase が意図されている可能性あり)を放出します。
プラズマ:血小板の抑制により、β-グルコシダーゼの放出は著しく減少します。

デオキシノイジシミリン、DNJ
PUGNAc
カスタノスペルミン

  

最後に、血清・プラズマ酵素の源に関する明確な一般的な参考があることは事実ですが、個人差、検出法、サンプル処理法等の要因により、酵素活性の正常範囲と源的解釈は具体的なシナリオに合わせて組み合わせる必要があります。

今後、私たちは ELISA 実験に関連する内容をさらに更新し続ける予定であり、皆様により包括的で実用的な参考資料を提供することで、科学的研究実験をより良く遂行できるよう支援いたします。


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