蛍光染料またはマーカーの特性
当社では、シアニンシリーズやFluorシリーズの染料に代表される各種小分子蛍光染料(通常、分子量約1000Dの蛍光染料を指します)を提供しています。これらは各種検査機器のほとんどの検出チャンネル/フィルターに適合し、多くの小分子蛍光染料は多重検出に使用できます。このシリーズの蛍光染料は、近紫外線、可視光線、近赤外線スペクトルをカバーし、一般的な励起光源や機器との互換性があります。以下に、一部の染料の詳細な紹介を提供します。これは、ユーザーが蛍光染料抗体タンパク質標識キット、蛍光二次抗体、フローサイトメトリー抗体などを選択する際の参考になります。
蛍光染料特性比較表
| 発光色名 | 染料名 | 一般的な用途 | Ex max/Em max | 同等/近似スペクトルの染料 |
|---|---|---|---|---|
| 青色 | Fluor350 | IFイメージング | 346nm/445nm | AMCA, Coumarin |
| 青紫色 | Fluor405 | FC,IFイメージング | 400nm/424nm | |
| 緑色 | Cyanine2 | IF Imaging | 490nm/510nm | |
| FITC | FC,IFイメージング | 495nm/520nm | ||
| Fluorescein-X | FC | 495nm/519nm | ||
| Fluor488 | FC,IFイメージング | 490nm/513nm | Cy2, Fluorescein-X,FITC (Fluorescein) | |
| 黄緑色 | Fluor430 | IF Imaging | 430nm/545nm | |
| Fluor532 | IF Imaging | 530nm/555nm | ||
| 黄色 | Cyanine3 | IF Imaging | 548nm/563nm | |
| Fluor555 | IF Imaging | 555nm/572nm | Cy3, TRITC (Rhodamine) | |
| 橙色 | Fluor568 | IFイメージング,FC | 578nm/602nm | Rhodamine Red |
| Fluor590 | IF Imaging | 590nm/620nm | ||
| Fluor594 | IFイメージング,FRET | 590nm/617nm | Texas Red | |
| テキサスレッド | Fluor647 | FC,IF Imaging | 651nm/668nm | Cy5,APC |
| Cyanine5 | IF Imaging | 646nm/662nm | ||
| Cyanine5.5 | IF Imaging,FRET | 675nm/694nm | ||
| 近赤外線 | Fluor680 | IF Imaging | 680nm/702nm | Cy5.5, IR680 |
| Fluor700 | FC | 702nm/723nm | ||
| Fluor750 | IF Imaging | 747nm/770nm | Cy7 | |
| Cyanine7 | IFイメージング,FRET | 750nm/773nm | ||
| Fluor770 | WB蛍光 | 770nm/790nm |
蛍光染料またはマーカーの特性紹介
Fluor350
Fluor350は優れた青色蛍光染料であり、クマリン染料7-AMCA骨格を基にした改質染料です。AMCAの優れた代替品として使用でき、蛍光イメージングやフローサイトメトリー分析によく使用され、良好な水溶性とpH非感受性を備えています。Fluor350の励起および発光スペクトルはDAPIのそれに近く、DAPIフィルターセットを使用して直接イメージングすることができます。




応用参考文献:
- Rothschild, K. J.; Gite, S.; Olejnik, J. Methods for the detection, analysis and isolation of nascent proteins. U.S. Pat. Appl. Publ. US 20110250609,2011.
- Zauner, G.; Lonardi, E.; Bubacco, L.; Aartsma,T. J.; Canters, G. W.; Tepper, A. W. J. W.Tryptophan-to-dye fluorescence energy transferapplied to oxygen sensing by using type-3 copper proteins. Chem.- Eur. J. 2007, 13, 7085--7090.
- Gee, K. R.; Hart, C. CR.; Haugland, R.; Patton,W. F.; Whitney, S. Site-specific labeling of affinitytags in fusion proteins. U.S. Pat. Appl. Publ. US.20060141554, 2006.
Fluor405
Fluor405青色蛍光染料の励起/発光極大は400/424nmで、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーで広く使用されている405nm紫色レーザーのスペクトル線とほぼ完全に一致しています。Fluor405の励起および発光スペクトルはBV421染料のそれと高度に重なっています。Fluor405はCascade Blue染料の誘導体ですが、構造改変後に蛍光特性が最適化されています。Fluor405染料と緑色蛍光団のスペクトル重なりは最小限で、多色応用の理想的な選択肢となっています。



応用参考文献:
- Jones SA, Shim SH, He J, Zhuang .Fast, three-dimensional super-resolution imaging of live cells.Nat Methods. 2011 Jun;8(6):499-508.
- Camila van Zanten , Dzmitry Melnikau , Alan G Ryder.Effects of Viscosity and Refractive Index on the Emission and Diffusion Properties of Alexa Fluor 405 Using Fluorescence Correlation and Lifetime Spectroscopies.J Fluoresc. 2021 May;31(3):835-845.
Fluor430
400-450nmの波長範囲で光を吸収する活性染料の中で、通常500nm以上では有意な蛍光が生成されません。Fluor430染料はこの波長範囲のギャップを埋めています。この染料は、430nmの吸収ピーク付近で励起されると、大きなストークスシフトと強い黄緑色蛍光を示します。


応用参考文献:
- Tsilivakos, V.; Gritzapis, A. Method of intracellular infectious agent detection in sperm cells. PCT Int.Appl. WO 2013144662, 2013.
- Arcangeli, A.; Becchetti, A.; Pillozzi, S.; Masselli,M.; De Lorenzo, E. Method and kit for the prevention and/or the monitoring of chemoresistance of leukemia forms. PCT Int. Appl. WO 2011058509,2011.
- Lewis B, Rathman S, McMahon RJ.Detection and quantification of biotinylated proteins using the Storm 840 Optical Scanner.J Nutr Biochem.2003 Apr;14(4):196-202.
Fluor488
Fluor488はスルホン化ローダミングリーンです。2つのスルホン酸イオンを導入することで、Fluor488の水溶性、pH安定性、および光安定性が大幅に向上しました。フルオレセイン染料とは異なり、Fluor488の蛍光は広いpH範囲(4-10)で変化しません。多重負電荷を持つため、分子間凝集が起こりにくく、複数の染料分子が同じタンパク質を標識する場合でも、蛍光の自己消光やタンパク質凝集を引き起こしにくいです。Fluor488はフルオレセイン(FITCまたはFAM)およびCY2の優れた代替品であり、生体複合体の単一分子検出、蛍光相関分光法、および蛍光偏光測定において極めて優れた性能を発揮します。また、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーでも広く使用されています。Fluor488は現在、最高の水溶性小分子緑色蛍光染料の一つです。






応用参考文献:
- Karver, M. R.; Weissleder, R.; Hilderbrand, S. A.Bioorthogonal reaction pairs enable simultaneous,selective, multi-target imaging. Angew. Chem., Int.Ed. 2012, 51, 920--922.
- Lundberg, E.; Sundberg, M.; Graeslund, T.; Uhlen,M.; Svahn, H. A. A novel method for reproducible fluorescent labeling of small amounts of antibodies on solid phase. J. Immunol. Methods 2007, 322,40--49.
- Comparison between photostability of Alexa Fluor 448 and Alexa Fluor 647 with conventional dyes FITC and APC by flow cytometry.Int J Lab Hematol. 2018 Jun;40(3):e52-e54.
Fluor555
Fluor555はオレンジ-オレンジレッド蛍光染料であり、Cyanine3の類似体で、Cyanine3およびTAMRA染料の代替品として広く使用されています。Fluor555染料は高極性、強い水溶性、優れた蛍光輝度と蛍光安定性を持ち、タンパク質/抗体標識用の優れた染料となっています。化学構造の観点からは、Fluor555の親核はシアニンCyanine3ですが、親核には最大4つのスルホン酸基が存在します。四スルホン酸構造により、この染料は非常に親水性になり、タンパク質表面に標識された場合、タンパク質表面の極性を変化させず、タンパク質の疎水性凝集や沈殿のリスクを低減し、染料の局所的な近接による蛍光消光の可能性を大幅に減少させます。そのため、Fluor555で標識されたタンパク質は通常、より強い蛍光を発します。ただし、現在市場に出回っているフローサイトメーターのほとんどは従来型(分光フローサイトメーターではない)であるため、レーザーとの互換性が最適ではなく、Fluor555染料は蛍光イメージングの分野でより多く使用されています。




応用参考文献:
- Arcangeli, A.; Becchetti, A.; Pillozzi, S.; Masselli,M.; De Lorenzo, E. Method and kit for the prevention and/or the monitoring of chemo resistance of leukemia forms. PCT Int. Appl. WO 2011058509,2011.
- Lundberg, E.; Sundberg, M.; Graeslund, T.; Uhlen,M.; Svahn, H. A. A novel method for reproducible fluorescent labeling of small amounts of antibodies on solid phase. J. Immunol. Methods 2007, 322,40--49.
Fluor568
Fluor568蛍光染料は561nmレーザーと完全に一致します。この橙赤色蛍光染料の最大励起/発光は約578/602nmで、多くの共焦点レーザー走査顕微鏡で使用されている561nmダイオードレーザーで最適な励起効果を達成できます。Fluor568はローダミン化合物の親核を持ち、2つのスルホン酸イオンが導入されて染料の水溶性と光学特性が最適化されています。励起されると明るい橙赤色蛍光を発し、非常に敏感で安定しており、低存在量の標的の検出に使用できます。優れた水溶性小分子蛍光標識染料です。


応用参考文献:
- Jafar Mahmoudian, Reza Hadavi, Mahmood Jeddi-Tehrani.Comparison of the Photobleaching and Photostability Traits of Alexa Fluor 568- and Fluorescein Isothiocyanate-conjugated Antibody.Cell J. 2011 Fall;13(3):169-72.
- Seyed Nasser Ostad, Sepideh Babaei , Ali Ahmad Bayat. Photobleaching Comparison of R-Phycoerythrin-Streptavidin and Streptavidin-Alexa Fluor 568 in a Breast Cancer Cell Line. Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 2019 Feb;38(1):25-29.
- Tamás Gajdos , Béla Hopp.Hot-Band Anti-Stokes Fluorescence Properties of Alexa Fluor 568.J Fluoresc.2020 May;30(3):437-443.
Fluor594
Fluor594はFluor568構造をベースにメチル化されたローダミン化合物です。2つのスルホン酸イオンも染料の特性を最適化する役割を果たしています。励起されると明るい赤色蛍光を発し、非常に敏感で安定しており、低存在量の標的の検出に使用できます。Fluor594は優れた水溶性小分子蛍光標識染料であり、様々な標的分子の標識に適しており、各種生物学的実験で広く使用されています。Fluor594染料で調製された複合体はスペクトルの赤色領域で蛍光を発するため、緑色蛍光プローブと組み合わせた多重標識実験に特に適しています。Fluor594のスペクトル特性はCyanine3.5およびTexas Redと類似していますが、蛍光強度が強く、Texas Redの優れた代替品となっています。




応用参考文献:
- Arcangeli, A.; Becchetti, A.; Pillozzi, S.; Masselli,M.; De Lorenzo, E. Method and kit for the prevention and/or the monitoring of chemo resistance of leukemia forms. PCT Int. Appl. WO 2011058509,2011.
- Green, D. P. L.; Rawle, C. B. Analysis system and method. PCT Int. Appl. WO 2009082242, 2009.
- N Panchuk-Voloshina , R P Haugland, J Bishop-Stewart. Alexa dyes, a series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates. J Histochem Cytochem. 1999 Sep;47(9):1179-88.
Fluor647
Fluor647蛍光染料のスペクトルはCyanine5のスペクトルとほぼ完全に一致するため、Cyanine5用に設計された光学フィルターとの互換性も最適になります。ただし、Fluor647抗体複合体の総蛍光強度は通常、Cyanine5複合体のそれよりも大幅に高くなります。さらに、Fluor647がほとんどのタンパク質、オリゴヌクレオチド、および核酸と結合した場合、その吸収または蛍光スペクトルはほとんど変化しないため、同じ置換度では総蛍光強度が高くなり、Cyanine5の優れた代替品となっています。



応用参考文献:
- Liming Ou, Qingyu Lv, Canjun Wu, Huaijie Hao. Development of a lateral flow immunochromatographic assay for rapid detection of Mycoplasma pneumoniae-specific IgM in human serum specimens.J Microbiol Methods. 2016 May:124:35-40.
- N Panchuk-Voloshina , R P Haugland, J Bishop-Stewart. Alexa dyes, a series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates. J Histochem Cytochem. 1999 Sep;47(9):1179-88.
- Ryo Tsumura , Ryuta Sato , Fumiaki Furuya.Feasibility study of the Fab fragment of a monoclonal antibody against tissue factor as a diagnostic tool.Int J Oncol. 2015 Dec;47(6):2107-14.
- Comparison between photostability of Alexa Fluor 448 and Alexa Fluor 647 with conventional dyes FITC and APC by flow cytometry.Int J Lab Hematol. 2018 Jun;40(3):e52-e54.
Fluor680
Fluor680染料のピーク励起波長は680nmで、最大発光波長は702nmです。そのスペクトル特性はCyanine5.5染料と類似しています。Fluor680染料の蛍光は、他の一般的な赤色蛍光染料(テトラメチルローダミン、R-フィコエリスリン、Fluor594、Fluor647など)の発光信号から明確に分離されているため、多色標識に非常に適しています。


Application References:
- Ogawa, M.; Regino, C. A.; Choyke, P. L.; Kobayashi,H. In vivo target-specific activatable near-infrared optical labeling of humanized monoclonal antibodies.Mol. Cancer Ther. 2009, 8, 232--239.
- N Panchuk-Voloshina , R P Haugland, J Bishop-Stewart. Alexa dyes, a series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates. J Histochem Cytochem. 1999 Sep;47(9):1179-88.
Fluor750
Fluor750はスペクトル的にCyanine7染料と非常に類似しており、Cyanine7の優れた代替品です。最大蛍光発光波長は770nmで、一般的に使用される遠赤色蛍光物質(Fluor647またはAPC)の最大発光波長から遠く離れているため、多色分析に便利です。


Application References:
- Paris-Robidas, S.; Emond, V.; Tremblay, C.; Soulet,D.; Calon, F. In vivo labeling of brain capillary endothelial cells after intravenous injection ofmonoclonal antibodies targeting the transferrin receptor. Mol. Pharmacol. 2011, 80, 32--39.
- Paudyal, P.; Paudyal, B.; Iida, Y.; Oriuchi, N.;Hanaoka, H.; Tominaga, H.; Ishikita, T.; Yoshioka,H.; Higuchi, T.; Endo, K. Dual functional molecular imaging probe targeting CD20 with PET and optical imaging. Oncol. Rep. 2009, 22, 115--119.
- Moinuddin Hassan 1, Victor Chernomordik, Rafal Zielinski.In vivo method to monitor changes in HER2 expression using near-infrared fluorescence imaging.Mol Imaging.2012 Jun;11(3):177-86.
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