Q1：誘導開始後 2〜3 週間経過しても明らかな骨化が見られないのはなぜですか？
これは、細胞の継代回数が過度に高いこと、または接種密度が過剰に低いことが原因である可能性があります。私たちは、継代回数が 8 未満（<8）の細胞を使用し、細胞融合度が 60%〜70% に達した時点で誘導を開始することを推奨します。
Q2：骨化が弱い場合、どのように対処すべきですか？
これは、誘導期間が不十分なことが原因である可能性があります。誘導時間を 21〜28 日間まで延長することを検討してください。
Q3：誘導の後期段階で細胞がシート状に脱落する場合は、どのように対処すべきですか？
1. 培養容器を 1% のゼラチンで適切な量で被覆してください。
2. 誘導開始後 2 週間以降、骨芽細胞が縁部で巻き上がったり脱落したりするリスクを最小化するため、3 日ごと完全培養液交換から、2 日ごと半量培養液交換に変更してください。これは、完全培養液の交換による撹乱により細胞が浮遊することを防ぐのに役立ち、豊富な石灰化ノジュール（骨化ドット）が現れるまで継続して行うべきです。
Q4：白い沈殿物が現れた場合でも培養液を使用することはできますか？
白い沈殿物は、グルタミンまたはカルシウム塩の低温結晶化によって引き起こされている可能性があります。沈殿物が 37°C で溶解したら、通常通り培養液を使用できます。しかし、著しい濁りや着色した沈殿物を観察する場合は、培養液が汚染されているか有効期限を超えており、直ちに廃棄すべきです。
Q5：誘導の初期段階で大量の細胞が死滅するのはなぜですか？
これは、培養媒体を事前に 37°C に予熱していないこと、異常な pH レベル、または誘導媒体に細胞毒性を示す抗生物質が存在することが原因である可能性があります（抗生物質は低温環境では特に細胞へのダメージを受けやすいため）。私たちは、培養媒体を 37°C に予熱し、使用前に pH を 7.2〜7.4 まで調整して平衡状態にするように推奨します。
Q6：培養プレートの一部のウェルではアリザリンレッドが黄色く、他のウェルでは赤色または紫色に見えるのはなぜですか？
アリザリンレッドは pH の条件によって異なる色を示します。一般的にオレンジ〜黄色から紫色の範囲に変化します。当社が骨形成誘導媒体とともに提供しているアリザリンレッド溶液の pH は 4.2 で、通常黄色または赤色として現れます。染色プロセス中、局所環境の変化や細胞サンプルによる酸性・アルカリ性物質の生成により色がシフトするため、黄色、赤色、または紫色に変わることは一般的で正常な現象です。